利用CRISPR-Cas9核酸酶技术制备基因敲除小鼠模型

分类：实验室技术发布日期：2013-7-8 11:9:16 点击：3497

近年来发展的CRISPR-Cas9核酸酶技术（图1），为快速制备基因敲除小鼠开辟了新的技术途径。通过体外转录，获得编码Cas9酶与SgRNA，然后通过受精卵显微注射，获得基因敲除小鼠模型。我们可以根据客户的需求设计高效特异的Guide RNA序列。此外，我们可以通过设计基于Cas(D10A)突变体的双切口CRISPR-Cas9技术，有效地降低“脱靶”效应，最大程度地保证了基因敲除的准确性。

图1.利用CRISPR-Cas9重组酶技术制备基因敲除小鼠。在没有外加供体模板DNA的情况下，细胞在CRISPR-Cas9剪切目的基因后，通过NHEJ途径产生移码突变，从而获得基因敲除小鼠；在外加供体模板DNA后，细胞在CRISPR-Cas9剪切目的基因后，通过HDR途径将外源DNA序列引入到基因组中，从而获得基因敲入小鼠或条件型基因敲除小鼠。